核苷酸切除修复基因XPB反义RNA表达质粒的构建及其功能的初步研究

摘要：

背景与目的:核苷酸切除修复机制是细胞修复损伤DNA的重要途径,肿瘤细胞的耐药常伴随DNA损伤修复基因表达增强,采取反义策略降低细胞的DNA损伤修复能力可以增加肿瘤细胞的药物敏感性.本研究拟构建能在哺乳动物细胞中表达XPB反义RNA的表达质粒pcDNA-XPB/AS(XPB:着色性干皮病B基因),并初步探讨其对肺癌细胞DNA损伤修复能力及抗肿瘤药物耐药性的影响.方法:采用RT-PCR技术扩增的XPBcDNA 5′端一段69～520 bp的序列被反向插入表达质粒pcDNA3.1/His.将该重组质粒瞬时转染肺癌A549细胞.单细胞凝胶电泳(SCGE)比较阿霉素诱导的转染前后细胞DNA损伤修复情况.MTT法检测转染前后细胞对阿霉素的敏感性.结果:酶切图谱分析和基因测序证实反义表达质粒构建成功.RT-PCR显示转染细胞XPBmRNA表达水平下降.以4.0μg/ml阿霉素诱导细胞DNA损伤,SCGE显示转染细胞修复DNA损伤能力受到抑制.MTT显示未转染细胞与转染细胞对阿霉素的敏感性存在差别,但无统计学意义.结论:构建的反义表达质粒能下调转染细胞XPB mRNA表达,抑制细胞DNA损伤修复能力,为进一步研究XPB基因功能奠定了基础.

关键词：着色性干皮病B基因(XPB)、核苷酸切除修复、反义RNA、药物敏感性

所属期刊栏目：22

分类号：Q782(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家自然科学基金39990570

在线出版日期：2003-12-05（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：907-911