AP-1和NF-κB荧光酶双报道系统的建立

摘要：

@@ 报道基因广泛应用于基因表达和调节的研究 , 它对细胞信号转导研究具有重要意义 . 细胞 信号转导通路具有网络化的特点 , 这要求在同一反应体系中能同时确定一个以上基因或转录 因子的反式激活活性 . 常用的报道基因 , 如对氯霉素乙酰转移酶基因的测定方法存在操作繁 琐等不足 . 萤火虫荧光酶 ( firefly luciferase) 和水母荧光酶 ( renilla luciferase) 分 别为 61kDa和 36kDa的单体蛋白 , 其活化均不需翻译后修饰 . 萤火虫荧光酶在 ATP、 Mg2+ 及氧 存在下 , 使甲虫荧光素 ( beetle luciferin) 发生氧化而发出光子 ; 该系统可检测 1020个荧 光分子的荧光素酶 , 能用于一些低表达、启动子活性较弱基因的检测 , 且在 107分子数以内呈 线性关系 . 而水母荧光酶利用氧而催化肠腔素 ( coelenteraxine) 生成水母发光蛋白发出蓝 色荧光 . 这两种荧光酶在进化上起源不同 , 其结构和所需底物也各异 ; 利用这种差异可以建 立荧光酶双报道系统 . 本研究通过合成带有水母荧光酶基因的激活蛋白 1(activator protein, AP 1)报道质粒 , 插入带有荧火虫荧光酶的核转录因子κ B (nuclear factor κ B, NF κ B), 建立了 AP 1和 NF κ B荧光酶双报道系统 ; 并将之应用于 EB病毒潜伏膜蛋白介 导的不同信号转导通路相互关系的研究 . 现将有关结果报道如下 .

关键词：激活蛋白1、核转录因子κB、荧光酶双报道系统

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分类号：R730.2(肿瘤学)

资助基金：国家重点基础研究发展计划973计划G1998051201;国家自然科学基金30000087

在线出版日期：2004-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：701-703