反义核酸抑制靶基因表达对EB病毒转化细胞的生长控制研究

摘要：

背景与目的:近年研究表明,EB病毒(Epstein-Barr virus,EBV)潜伏性膜蛋白基因(latent membrane protein gene,LMP)在鼻咽癌的发生和发展中起着重要作用.本研究着重构建体外基因反义转录系统,研究反义 LMPmRNA对 EBV转化细胞基因表达的抑制作用.方法:构建和制备反义核酸单链有效的体外转录系统 ; 设计和建立反义原位示踪技术,以探测正、反义链配对互补聚合体的定位 ; 通过对 EBV转化细胞系(C1936和 B95-8)的反义控制,测定细胞生长的抑制率,观测转化细胞凝集表型 ; 通过对 EBV-LMP基因表达的检测和 MTT吸收活性的测试,测定转化细胞在基因转录下调之后的生存状态.结果:构建成制备反义 RNA的 SP6/T7双向启动子的体外基因转录系统.反义工程产物 AsLMPmRNA通过胞饮作用掺入转化细胞后,经原位示踪显示,正 -反义链聚合物的封闭位点主要在 mRNA前体剪接加工成熟的后阶段 ; 转化细胞增殖能力下降(生长抑制率 85.5%),细胞转化的凝集表型受抑制,MTT吸收值显著降低,显示被反义控制的 C1936和 B95-8细胞系的生长受到严重的抑制.应用反义原位示踪系统(antisense tracing system in situ,ATSIS)显示,AsLMPmRNA有特定靶点和抑制效应.结论:本实验所建成的体外反义转录系统所制备的 RNA反义工程产物(AsLMPmRNA),有特定的选择靶点作用和高效的生物活性(特定基因 LMP表达负调节).这为反义控制转化细胞和开发反义基因工程药物提供了重要依据.

关键词：反义RNA、EB病毒、鼻咽肿瘤、反义原位示踪

所属期刊栏目：21

分类号：Q784;R739.63(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家重点基础研究发展计划973计划G1998051201;广东省"五个一工程"项目广卫95278;国家自然科学基金39370782

在线出版日期：2004-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：16-20