Hsv-tk、重组人 IL-2、 TNF-α融合基因表达载体的构建与鉴定

摘要：

目的：构建含有Hsv-tk、重组人IL-2(rhIL-2)、TNF-α(rhTNF-α)不同组合融合基因的逆转录病毒表达载体。方法：经分离人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)总 RNA，以反转录聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)制备人 IL-2 互补 DNA(complementary DNA,cDNA)模板。分别以 PCR方法扩增 3种基因，扩增产物纯化后克隆至测序载体 pGEM-T-Easy，挑取阳性克隆经鉴定后测序。将测序正确的各目的基因分别从测序载体相应酶切位点消化后，回收并纯化后与经相同双酶消化后的线性化 PLXSN表达载体连接，连接产物常规转化大肠杆菌 DH5α感受态细胞，经筛选后随机挑取阳性菌落后，提取质粒酶切鉴定插入片段大小和位置以获得正确重组子。按上述定向克隆方法依次将各片段正向插入至 PLXSN表达载体的多克隆位点间，以构建含不同融合基因的真核表达载体。结果：经限制性酶切分析及 PCR方法鉴定，各插入基因及融合基因大小、位置、方向均正确无误。结论：Hsv-tk、IL-2、TNF-α不同组合融合基因表达载体的成功构建为喉癌的基因治疗提供部分实验基础 ,也为表达具有多功能活性的新型融合蛋白和发现细胞因子的新功能提供有利条件。

关键词：Hsv-tk基因、白细胞介素-2、肿瘤坏死因子-α、融合基因

所属期刊栏目：20

分类号：Q782(基因工程（遗传工程）)

在线出版日期：2004-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：1019-1023