SAGE方法分析永生化BEP2D细胞及α粒子诱发恶性转化BEP2D细胞的基因表达

摘要：

目的：采用基因表达系列分析（serialanalysisofgeneexpression,SAGE）方法，分析永生化BEP2D细胞及α粒子诱发恶性转化BEP2D细胞的基因表达。方法：细胞培养,收获永生化BEP2D细胞及α粒子诱发恶性转化BEP2D细胞;提取细胞总RNA,分离mRNA,合成生物素标记的双链cDNA;采用SAGE方法获取标签序列，结合UniGene文库分析标签代表的转录本，最终通过SAGE软件分析标签丰度，比较两组细胞基因表达差异。选取SAGE实验得到的在两组细胞中表达的已知基因Smad7和CCR11，以RTPCR方法制备探针，用两组细胞等量总RNA为样本，做Northernblot杂交。结果：建立了2个独立的SAGE文库。一个是1.5Gyα粒子照射诱发恶性转化BEP2D细胞的SAGE文库，一个是永生化BEP2D细胞SAGE文库。从2个文库中分别挑取克隆53个、50个，进行测序，测序一共得到总标签2331个，代表单一转录本252个，有70％的SAGE标签可找到与之一一对应的基因，有84个核糖体蛋白基因，约占33％；有12个转录本（4.8％）找不到与之理想匹配的已知基因；2个SAGE文库间，大多数基因表达丰度相近。对2个SAGE文库进行比较发现有在永生化细胞中高表达的基因，也有在恶转细胞中高表达的基因。Northernblot杂交证实SAGE方法得到的TGFβ诱导的Smad7基因在恶转BEP2D细胞中表达略高，化学激活物受体CCR11基因在永生化BEP2D细胞高表达。结论：（1）现有SAGE结果给出两组细胞基因表达丰度及表达差异的趋势。（2）SAGE方法结合Northernblot杂交，证实TGFβ诱导的Smad7基因在恶转BEP2D细胞中表达略高，化学激活物受体CCR11基因在永生化BEP2D细胞高表达。提示Smad7基因参与细胞恶转，CCR11基因对维持细胞正常生长有作用。（3）SAGE方法同时定量比较两组或两组以上mRNA间基因表达水平,简便、快捷，尤其适于筛查已知基因的新功能。

关键词：基因表达系列分析、BEP2D细胞、α粒子

所属期刊栏目：20

分类号：R734.2(肿瘤学)

在线出版日期：2004-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：12-17