酸性神经酰胺酶shRNA表达载体的构建及鉴定

摘要：

目的 构建特异性抑制人酸性神经酰胺酶(acid ceramidase,AC)基因表达的短发夹RNA (shorthairpin RNA,shRNA)载体,筛选出基因沉默效果最明显的shRNA,以明了shRNA对头颈肿瘤细胞AC表达的影响.方法 针对人AC基因设计并构建4个shRNA质粒,转染人肾上皮细胞系293T细胞,通过实时定量PCR及Western blot的方法筛选出沉默效果最明显的shRNA序列,以该序列构建慢病毒载体感染人鼻咽癌CNE-2Z细胞及人喉鳞状细胞癌Hep-2细胞,验证其对这些细胞的基因沉默效果.结果 4个shRNA质粒转染293T细胞后AC mRNA及蛋白表达均降低,其中sh1340的抑制效果最明显.sh1340慢病毒感染肿瘤细胞后AC基因沉默的效果分别为CNE-2Z (79.3±0.5)％和Hep-2(80.7±5.1)％.结论 成功构建特异性抑制AC表达的shRNA表达载体,为进一步研究AC的功能及头颈肿瘤的基因治疗奠定基础.

关键词：RNA、小分子干扰、肿瘤、鳞状细胞、酸性神经酰胺酶

所属期刊栏目：20

资助基金：国家自然科学基金资助项目30973286

在线出版日期：2015-06-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：235-238