Jab1靶向shRNA质粒构建及其对Hep-2细胞目的基因沉默效应

摘要：

目的 利用RNA干扰技术构建Jab1基因靶向shRNA质粒,观察目的 基因沉默效应及对人喉鳞状细胞癌细胞株Hep-2细胞(简称Hep-2细胞)的影响.方法 设计合成以Jab1基因为靶向目标的shRNA,将其定向克隆到真核表达载体pGenesill.1中形成重组质粒,利用脂质体介导的方法将质粒转染至Hep-2细胞,通过WST-8、Western blot的方法对细胞凋亡及蛋白水平表达变化进行检测,分析shRNA干扰质粒对喉鳞状细胞癌细胞(简称喉癌细胞)的影响.结果 成功构建了Jab1基因靶向的pJab1以及阴性对照pKB真核重组质粒.WST-8结果显示pJab1重组质粒能显著抑制Hep-2细胞的增殖活性,与对照组相比具有显著性差异(P< 0.001).Western blot结果显示Hep-2-pJab1细胞Jab1蛋白表达量明显降低,p27蛋白表达量明显升高,与对照组相比差异显著(P< 0.001),结论构建靶向Jab1癌基因的shRNA干扰质粒能够下调Jab1基因的表达,上调p27基因的表达,抑制Hep-2细胞在体外的增殖.

关键词：喉肿瘤、RNA干扰、细胞凋亡、质粒、转染

所属期刊栏目：18

在线出版日期：2015-06-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：295-297