Survivin小干涉RNA和GRIM-19共表达质粒的构建
目的 构建survivin小干涉RNA和干扰素,维甲酸联合应用诱导细胞凋亡相关的基因(gene associated withretinoid interferon induced mortality-19,GRlM-1 9)共表达质粒为探讨联合基因对喉癌细胞凋亡和增殖的影响奠定基础.方法 以survivin小干涉RNA重组质粒pGCsilencer-siRNA-survivin(简称psi-survivin)为模板设计PCR引物,PCR产物经测序后与线性化pCDNA3.1-GRIM-19(简称p-GRIM-19)连接,构建survivin小干涉RNA和GRIM-19共表达质粒pCDNA3.1-siRNA survivin/GRIM-19(简称p-siRNAsurvivin/GRIM-19).将质粒用脂质体lipofetamine2000包裹转入人喉癌Hep-2细胞中,用半定量RT-PCR检测survivin和GRIM-19 mRNA的含量.结果 构建的survivin小干涉RNA和GRIM-19共表达质粒P-siRNA survivin/GRIM-19经酶切电泳和测序证实碱基序列的正确性,p-siRNAsurvivin/GRIM-19转染人喉癌Hep-2细胞,从mRNA水平能降低survivin的表达,抑制率55.9%,同时增加GRIM-19表达,表明共表达质粒的构建是成功的.结论 构建的siRNA survivin和GRIM-19共表达质粒从mRNA水平能降低survivin的表达,同时增加GRlM-19表达,为进一步实验奠定了基础.
RNA干扰、喉肿瘤、凋亡抑制蛋白类、生存素、GRIM-19基因
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吉林省科技厅基金资助项目200705213
2015-06-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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