靶向人Trb3基因shRNA真核表达载体的构建及鉴定

摘要：

目的 构建并鉴定靶向果蝇同源蛋白3(tribbles-related protein 3,Trb3)基因的短发夹状RNA(short hairpin RNA,shRNA)真核表达载体,并检测其对靶基因的沉默效应.方法 根据Genbank数据库中Trb3序列,设计、合成3对互补并特异性编码其shRNA序列的寡核苷酸,克隆到线性化的pSUPER.retro.puro质粒载体中,并对重组质粒进行酶切分析及测序鉴定;脂质体介导重组质粒和pSUPER.retro.puro Vector转染舌鳞状细胞癌Tca8113细胞株,RT-PCR和Western-Blot检测其对靶基因Trb3的表达影响.结果 酶切及测序鉴定重组质粒pSUPER.puro-shTrb3序列正确;转染重组质粒后舌鳞状细胞癌Tca113细胞中Trb3 mRNA和蛋白表达水平相对于空载体组明显下降,shRNA可以特异性沉默Trb3基因.结论 成功构建了靶向人Trb3基因的shRNA真核表达载体,为进一步研究Trb3在舌鳞状细胞癌和其他头颈肿瘤中的作用奠定了基础.

关键词：头颈部肿瘤、果蝇蛋白质类、RNA干扰、脂质体、真核表达载体

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资助基金：国家自然科学基金30960444;云南省科技计划项目联合专项2009CD186;云南省教育厅科研项目08C0095;华南肿瘤学国家重点实验室开放课题303040966014

在线出版日期：2015-06-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：60-62