稳定表达siRNA-STAT3基因Hep-2细胞系的建立
目的 建立稳定表达siRNA-STAT3基因的Hep-2细胞系,为进一步探讨STAT3在喉癌中的作用机制提供基础.方法 产生针对STAT3的小发卡状RNA寡核苷酸,连接到PGPU6/GFP/Neo载体,双酶切和质粒测序鉴定真核表达质粒PGPU6/GFP,Neo-siRNA-STAT3,G418筛选稳定转染细胞系,蛋白印迹法测定P-STAT3的表达.分别用MTT法绘制生长曲线和平板克隆形成实验测定单细胞增殖能力.结果 构建了重组干扰质粒并筛选出了阳性克隆,蛋白印迹法鉴定STAT3被抑制后P-STAT3表达也明显下降.生长曲线显示siRNA-STAT3组3天后抑制效应才较为明显(P=0.001),5 d后抑制效应更加突出(P=0.000),其抑制效应呈时间-效应关系.另外,siRNA-STAT3组单克隆形成率也明显低于对照组(P=0.000).结论 本研究筛选了可稳定、较高水平表达siRNA-STAT3的Hep-2细胞系.干扰STAT3表达对细胞增殖抑制的作用较为明显.
喉肿瘤、癌、鳞状细胞、转录激活因子3、转染、细胞增殖
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2015-06-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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