腺相关病毒介导RNA干扰抑制EB病毒潜伏膜蛋白1基因表达

摘要：

目的 构建针对鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)EB病毒(Epstein-Barr virus,EBV)潜伏膜蛋白1(Iatent memb rane protein 1,LMP-1)的特异性发夹状RNA(small hairpin RNA,shRNA)干扰序列的重组腺相关病毒(recombinantadeno-associated virus,rAAV)载体(rAAV-shRNA-LMP-1),介导其体外表达并鉴定其生物活性.方法 设计针对EBV-LMP-1的特异性shRNA干扰序列,采用分子克隆的方法,将干扰序列及U6启动子插入pAAV-2质粒中,采用无需包装辅助病毒的双质粒共转染方法制备rAAV-shRNA-LMP-1,测定其滴度及感染效率,RTPCR鉴定目的基因的抑制效率.结果 以rAAV-EGFP 5×104v.g(virus genome,病毒基因组数)/细胞转染C666-1细胞,转染效率大于95%,PT-PCR鉴定rAAV-shRNA-LMP-1以5×104v.g/细胞转染C666-1后目的基因抑制效率大于90%.结论 通过rAAV介导RNA干扰能有效抑制LMP-1基因表达,为进一步研究肿瘤基因治疗,尤其是动物实验奠定了基础.

关键词：疱疹病毒4型、人、RNA干扰、鼻咽肿瘤、基因、肿瘤抑带

所属期刊栏目：13

分类号：R3(基础医学)

资助基金：国家自然科学基金30471945;广东省科技计划公关项目2003C30303

在线出版日期：2006-12-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：762-765