激光共聚焦显微镜不同参数对荧光漂白的影响

摘要：

目的:探讨激光共聚焦显微镜不同参数对活细胞荧光漂白的影响.方法:采用不同的激光共聚焦显微镜拍摄参数对钙黄绿素标记的骨肉瘤细胞进行时间序列成像,分析随拍摄帧数增多荧光强度的变化.结果:激光功率增大、激光驻留时间延长都会增加荧光漂白,当保持激光驻留时间与激光强度的乘积(即照射在样品上的总能量)不变时,驻留时间最长的组荧光漂白率最高(P<0.05),驻留时间最短的组荧光漂白率最低(P<0.05);NA值相似的情况下,20倍物镜结合ZOOM=2的模式比直接用40倍物镜拍摄荧光漂白率更高;细胞在氧含量3％的培养条件中预处理1 h,与常规培养条件比,在拍摄早期加剧光漂白,在拍摄后期延缓光漂白.结论:对活细胞进行三维重建或时间序列成像时,建议先通过预试验找到光漂白率最小且同时满足分辨率需求的拍摄参数组合,可以考虑高激光功率、短驻留时间的组合;非必须情况,尽量避免使用ZOOM模式;如何利用低氧条件缓解对活细胞的光漂白尚需进一步探索.

关键词：激光共聚焦显微镜;光漂白;活细胞;骨肉瘤细胞;钙黄绿素

所属期刊栏目：40

分类号：Q336;R738.1(人工选择与自然选择)

资助基金：四川省科技计划No.2020YJ0063

在线出版日期：2022-01-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：704-710