高表达MYH9通过激活AKT/c-Myc通路抑制非小细胞肺癌细胞凋亡

摘要：

目的 探讨肌球蛋白重链9(MYH9)对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞增殖、凋亡和对顺铂敏感性的影响并探讨其作用机制.方法 常规培养6株NSCLC细胞系(A549、H1299、H1975、SPCA1、H322、H460)和1株正常支气管上皮细胞系(16HBE)采用Western blot法检测MYH9的表达情况;采用免疫组织化学染色法检测NSCLC患者组织MYH9的表达,实验分为癌组织(49例)和癌旁组织(43例);常规培养H1299和H1975细胞系,使用CRISPR/Cas9技术构建MYH9敲除的NSCLC细胞系,实验分为sgNC组,sgMYH9组,采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)、克隆形成实验检测敲除MYH9对肺癌细胞增殖的影响;Western blot实验、细胞凋亡流式细胞术检测MYH9对细胞凋亡的影响;通过IC50法检测敲除MYH9的肺癌细胞对顺铂敏感性的影响,实验分为sgNC组、sgMYH9组;培育小鼠肿瘤异种移植物模型验证MYH9体内生物学功能,实验分为sgNC组、sgMYH9组.结果 与癌旁组织相比,MYH9在癌组织中上调(P<0.001),高表达患者具有更短的生存(P=0.023).敲除MYH9抑制细胞增殖(P<0.001),促进细胞凋亡(P<0.05),增加对顺铂的化学敏感性.此外,MYH9的耗竭显著抑制了体内肿瘤生长(P<0.001).分子机制表明,敲除MYH9使AKT/c-Myc轴失活(P<0.05),从而抑制BCL-2样蛋白1的表达(P<0.05),促进BH3相互作用结构域死亡激动蛋白和凋亡调节剂BAX的表达(P<0.05),并激活胱天蛋白酶3和胱天蛋白酶9(P<0.05).结论 MYH9通过AKT/c-Myc轴调节细胞凋亡,从而促进NSCLC进展.

关键词：MYH9、CRISPR-Cas9、非小细胞肺癌、细胞凋亡、顺铂耐药、Akt/c-Myc信号通路

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分类号：R734.2;R285.5;R979.1

资助基金：广东省自然科学基金项目2014A030310450

在线出版日期：2023-05-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共10页

页码：527-536