CCN3对小鼠胚胎成纤维细胞增殖的影响

摘要：

目的 探究肾母细胞瘤过表达因子(NOV/CCN3)对间充质干细胞增殖的影响及调控机制,为CCN3能否作为促增殖因子在骨组织工程的应用提供理论依据.方法 以小鼠成纤维细胞(MEFs)为间充质干细胞模型,利用重组腺病毒Ad-CCN3和Ad-siCCN3分别上调、下调MEFs中CCN3表达;流式细胞术检测不同处理组细胞周期、凋亡变化情况;Westernblot检测增殖指标PCNA、周期蛋白cyclin E、cyclin B1以及凋亡指标Bax、Bc1-2蛋白表达量,明确CCN3对MEFs增殖和凋亡的影响;ELISA检测CCN3蛋白分泌水平;RT-qPCR和Western blot检测Notch信号通路经典受体Notch1、配体DLL1、下游关键蛋白和/基因Hey1、p300、H3K9,以及MAPK通路相关蛋白ERK1+2和p-ERK1+2表达变化情况.结果 流式细胞术结果显示:与对照组相比,Ad-CCN3组细胞增殖指数增加(P＜0.01),细胞凋亡百分比减少(P＜0.05);且相关增殖凋亡指标PCNA、cyclinE、Bcl-2蛋白表达增加(P＜0.05);RT-qPCR和Western blot结果显示过表达CCN3明显促进Notch信号通路中Notch1表达(P＜0.01),但抑制DLL1和Hey1、p300、H3K9等表达(P＜0.05);而MAPK通路中ERK1+2和p-ERK1+2蛋白表达增加(P＜0.01).结论 CCN3可能通过与Notch1结合,抑制经典Notch信号通路,激活MAPK通路,促进MEFs增殖、抑制细胞凋亡,从而增加MEFs细胞数量,提示CCN3具有作为间充质干细胞的促增殖因子在骨组织工程发挥作用的潜在价值.

关键词：CCN3、Notch、间充质干细胞、细胞增殖、细胞凋亡、胚胎成纤维细胞

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资助基金：重庆市科委自然科学基金;重庆市渝中区基金;科技前沿项目

在线出版日期：2021-03-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：79-86