Fractalkine通过激活Wnt/β-catenin信号通路抑制脂多糖诱导的巨噬细胞M1型极化

摘要：

目的 研究Fractalkine(CX3CL1,FKN)对脂多糖(LPS)诱导的RAW264.7巨噬细胞免疫应答的作用机制.方法 体外培养RAW264.7细胞,使用慢病毒技术构建过表达FKN的稳定细胞珠.细胞分为8组:(1)空白对照组;(2)LPS组,细胞给予脂多糖(1μg/mL,12 h);(3)ICG-001组,细胞给与Wnt/β-catenin信号通路抑制剂ICG-001(10μmol/mL,48 h);(4)过表达FKN组;(5)ICG-001+LPS组,细胞给与ICG-001(10μmol/mL预处理36 h)后,加入脂多糖(1μg/mL,12 h);(6)过表达FKN+LPS组,过表达FKN细胞给与脂多糖(1μg/mL,12 h);(7)过表达FKN+ICG-001组,过表达FKN细胞给予ICG-001(10μmol/mL,48 h);(8)过表达FKN+ICG-001+LPS组,过表达FKN细胞给与ICG-001(10μmol/mL预处理36 h)后,加入脂多糖(1μg/mL,12 h);应用CCK-8细胞增殖实验检测ICG-001作用于巨噬细胞中的安全浓度;应用酶联免疫吸附(ELISA)实验检测巨噬细胞上清液中M1型极化因子TNF-α和IL-6的含量;应用蛋白质免疫印记(WB)实验检测巨噬细胞中FKN、Wnt/β-catenin通路关键因子Wnt-4和β-catenin、M1型极化因子iNOS、TNF-α和IL-6的蛋白表达水平;应用免疫荧光(IF)实验检测巨噬细胞中M1型极化因子IL-6蛋白的定位.结果 过表达FKN的RAW264.7细胞中FKN的蛋白水平较空白对照组明显升高(P<0.01).CCK-8实验显示ICG-001作用于RAW264.7细胞48 h的IC50为10μmol/mL.与LPS组相比,ICG-001+LPS组上清液中TNF-α和IL-6的分泌量以及细胞内TNF-α、IL-6和iNOS蛋白含量均升高(P<0.05),而细胞内FKN、Wnt-4和β-catenin蛋白含量均显著降低(P<0.01);EX-FKN+LPS组上清液中TNF-α和IL-6的分泌量以及细胞内TNF-α、IL-6和iNOS蛋白含量均显著降低(P<0.01),而细胞内FKN、Wnt-4和β-catenin蛋白含量均显著升高(P<0.01).与LPS组相比,ICG-001+LPS组中IL-6在细胞质中的定位增强,而EX-FKN+LPS组中IL-6在细胞质中的定位受到抑制.结论 过表达FKN通过激活Wnt/β-catenin信号通路抑制脂多糖诱导的巨噬细胞M1型极化.

关键词：巨噬细胞、极化、Fractalkine、Wnt/β-catenin信号通路

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资助基金：国家自然科学基金;广西自然科学基金项目;广西研究生创新计划项目

在线出版日期：2021-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：1726-1731