血清饥饿对原代人脐静脉内皮细胞周期同步化的影响

摘要：

目的：探讨人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells, HUVECs）的最佳饥饿条件，以建立高效稳定的HUVECs体外分离提取方法，并为HUVECs相关实验提供研究基础。方法用0.1%Ⅱ型胶原酶灌注脐静脉腔消化15 min，收集细胞并用内皮细胞专用培养基（含5%内皮细胞基础培养基、1%内皮细胞生长因子、1%青链霉素），置37℃，5%CO2培养箱培养。在倒置显微镜下观察细胞形态特点，并用细胞免疫荧光方法对所得细胞进行鉴定。用流式细胞术检测所得HUVECs的纯度，并检测0%、0.1%、0.5%、1%血清浓度的培养基饥饿处理0、6、12、18、24 h对细胞周期的影响。结果0.1%Ⅱ型胶原酶消化可以得到HUVECs，细胞培养呈典型的铺卵石状排列，细胞较密处呈涡旋状排列。免疫荧光检测细胞VIII因子相关抗原表达呈阳性。流式检测细胞纯度高达99.67%。不同血清浓度培养基培养6 h可获得70%左右的G0/G1期细胞；培养12 h可获得80%~90%的G0/G1期细胞；培养18、24 h可获得95%左右的G0/G1期细胞。结论0.1%Ⅱ型胶原酶充盈静脉管腔可以获得高纯度的原代HUVECs。完全无血清培养基培养12 h即可获得纯度超过80%的G0/G1期HUVECs。

关键词：人脐静脉内皮细胞、细胞原代培养、血清饥饿、细胞周期

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分类号：R73;S82

资助基金：国家自然科学基金81370449；广州市科技计划项目产学研协同创新重大专项201504291720212Supported by National Natural Science Foundation of China 81370449

在线出版日期：2016-08-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：1140-1143