经MHCⅡ通路的屋尘螨1类变应原T细胞表位融合肽疫苗载体的构建与表达

摘要：

目的：构建经MHCⅡ通路的屋尘螨1类变应原Der p 1的T细胞表位肽疫苗重组载体。方法分别合成TAT、IhC和含编码Der p 1的3段T细胞表位的融合核苷酸序列，用特异性引物PCR扩增相应的基因片段，分别用相应的双酶切后，用T4 DNA连接酶连接形成TAT-IhC-Der p 1-3T融合基因，并插入至原核表达载体pET-28a(+)中，构建重组原核表达载体pET-28a(+)-TAT-IhC-Der p 1-3T，Bam HⅠ和XhoⅠ进行双酶切和测序鉴定。重组载体转化大肠杆菌E. coli BL21（DE3）菌株，IPTG诱导后，经SDS-PAGE电泳分析和Western blot验证，纯化TAT-IhC-Der p 1-3T蛋白后进行IgE结合试验。结果双酶切和测序结果表明，成功构建了pET-28a-TAT-IhC-Der p 1-3T重组原核表达载体；SDS-PAGE电泳分析显示TAT-IhC-Der p 1-3T可诱导表达；Western blot检测表明该融合蛋白纯化成功；IgE结合试验表明TAT-IhC-Der p 1-3T结合屋尘螨过敏病人血清IgE的能力强于Der p 1变应原（P<0.001）。结论成功构建了可表达经MHC通路的编码Der p 1的3段T细胞表位的重组pET-28a-TAT-IhC-Der p 1-3T载体，纯化的TAT-IhC-Der p 1-3T具有较强的IgE结合能力，从而为后续经MHC通路的特异性免疫治疗奠定基础。

关键词：屋尘螨、融合肽疫苗、1类变应原、原核表达、T细胞表位、IgE结合试验

分类号：R39;R72

资助基金：国家自然科学基金81270091，30872367，81172790

在线出版日期：2015-02-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：174-178