Exendin-4通过PI3K/Akt信号通路促进脂肪干细胞旁分泌细胞因子

摘要：

目的 探讨Exendin-4促进脂肪来源干细胞(ADSCs)旁分泌细胞因子的机制.方法 混合酶消化法提取和培养SD大鼠腹股沟处的脂肪干细胞,使用流式细胞学检测有或无Exendin-4处理后的第4代ADSCs表面标记物,MTT法绘制0、1、5、10、20 nm/L不同浓度Exendin-4下的ADSCs生长曲线;qPCR法检测不同浓度Exendin-4处理12h后bFGF、VEGF、HGF、IGF-1的表达变化.Western blotting和qPCR检测Exendin-4对于Akt通路的作用.同时添加通路阻断剂LY-294002,使用ELISA检测Akt通路阻断后Exendin-4对于旁分泌蛋白的影响.结果 分离培养的ADSCs高表达CD29、CD90、CD105,低表达CD34、CD45,并且能够多向分化为脂肪细胞、骨细胞,符合间充质干细胞的表型特点.Exendin-4处理后,不仅不会改变ADSCs的表型,还能以浓度依赖方式促进ADSCs在体外增殖(P＜0.05).不同浓度Exendin-4处理ADSCs 12 h后,旁分泌蛋白bFGF、VEGF、HGF、IGF-1的表达量逐渐提高,其中10 nm/LEx-4处理12 h可能为最佳处理浓度(P＜0.05).Western blotting和qPCR提示Exendin-4能够显著提高胞内Akt的磷酸化水平,而给予LY-294002后,磷酸化Akt表达减弱,同时ADSCs培养液上清中bFGF、VEGF、HGF、IGF-1的含量也明显降低(P＜0.05).结论 短暂Exendin-4处理不会改变ADSCs表型,但能加强细胞的增殖能力,且以剂量依赖方式促进干细胞旁分泌细胞因子bFGF、VEGF、HGF、IGF-1.10 nm/L可能为Exendin-4最适促旁分泌浓度,其扩大干细胞旁分泌的机制部分是通过激活PI3K/Akt信号通路来介导.

关键词：脂肪干细胞、Exendin-4、旁分泌、PI3K/Akt信号通路

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分类号：R32;R68

资助基金：国家高技术研究发展计划863计划2011AA020101;国家自然科学基金81270186,81102079Supported by National High Technology Research and Development Program of China2011AA020101;National Natural Science Foundation of China81270186,81102079

在线出版日期：2015-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：1395-1401