稳定过表达mir-101结直肠癌细胞株的建立及其靶基因的鉴定

摘要：

目的：构建稳定过表达mir-101的SW620细胞亚株并鉴定mir-101的靶基因。方法运用荧光定量PCR技术检测结直肠癌细胞株中mir-101的表达水平。利用GV209-mir101慢病毒感染SW620细胞，建立稳定过表达mir-101的细胞株。扩增包含mir-101结合位点的RAC13'UTR基因片段并将其亚克隆至psiCHECK-2载体，对此重组载体进行定点突变构建psiCHECK-2-Rac1-Mut；并用双萤光素酶报告实验检测RAC13'UTR相对荧光素酶活性。结果稳定过表达mir-101的细胞株中，mir-101的表达明显高于对照组。双萤光素酶报告实验证实mir-101 inhibitors可以上调3'UTR相对荧光素酶活性。稳定过表达mir-101， RAC1表达下调；而干扰mir-101之后RAC1表达上调。结论成功构建稳定过表达mir-101的SW620细胞亚株。RAC1是mir-101的靶基因。

关键词：结直肠癌、mir-101、慢病毒、双荧光素酶报告实验、RAC1

分类号：R73;R57

资助基金：国家自然科学基金81272758，81302158@@@@Supported by National Natural Science Foundation of China 81272758,81302158

在线出版日期：2014-08-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：928-933