真核表达BMP4成熟肽及其对iPS细胞的分化抑制作用

摘要：

目的 研究BMP4因子在诱导型干细胞(iPS细胞)培养过程中的作用和起作用的相关通路.方法 通过RT-PCR的方法从小鼠的胎盘组织中扩增BMP4成熟肽,并且在其N末端连接IgK分泌肽,此融合的片段克隆至pPYCAG载体上.重组质粒pPYCAG-IgK-BMP4转染至293T17细胞中并进行嘌呤霉素的筛选.通过细胞免疫荧光和Western blot方法鉴定出表达BMP4的阳性克隆.为进一步检测上清中BMP4的生物活性,iPS细胞培养于含BMP4因子的细胞培养上清和LIF因子中,连续培养3代,并进一步观察细胞表型、三胚层细胞的分化潜能和多潜能相关基因的表达水平.结果 Smad1被分泌至上清中的BMP4磷酸化.当培养基中含BMP4同时加入LIF因子后,可以有效抑制iPS细胞分化.在此种方法培养3代后,不仅iPS细胞的表型可以有效维持,iPS细胞中多潜能相关的基因表达水平也未受到影响,同时这些iPS细胞仍具有向三个胚层分化的能力.结论 BMP4可高效表达在真核细胞中,有效地使培养iPS细胞保持其多向分化潜能.

关键词：Igk-BMP4、免疫球蛋白κ链、过表达、诱导型干细胞、细胞分化

所属期刊栏目：32

分类号：R34(人体生物化学、分子生物学)

资助基金：National Basic Research Program of China973 Program,2010CB530400;Key Project of National Natural Science Foundation of China30930111;Changjiang Scholar Chair Professor Project[2009]17;Shanghai Education Innovation Project08YZ56;"Shu Guang" Project supported by Shanghai Municipal Education Commission and Shanghai Education Development Foundation10GG20;Shanghai University Innovation Team ProgrammerShanghai Education Commission,Division 6[2009];the China Postdoctoral Science Foundation20090450725;国家基础研究973项目2010CB530400;国家自然科学基金重点项目30930111;长江学者计划Teach people[2009]17;上海创新团队项目08YZ56;曙光计划10GG20;上海高校创新团队项目Shanghai Education Commission,Division 6[2009];中国博士后基金20090450725

在线出版日期：2013-01-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：1383-1388