利用慢病毒载体构建稳定干扰β-catenin的人胚胎干细胞系

摘要：

目的 建立β-catenin稳定干扰的人胚胎干细胞系.方法 利用β-catenin慢病毒干扰质粒PLKO.1-puro-β-catenin转染包装细胞293FT制备重组慢病毒,并感染人胚胎干细胞,采用嘌呤霉素筛选稳定表达shβ-catenin人胚胎干细胞克隆；试验分为稳定转染β-catenin干扰质粒组(Shβ-catenin)、稳定转染空白载体组(VECTOR)和对照未感染组(WT)三组,RT-PCR检测干扰后β-catenin mRNA表达；进一步免疫荧光检测干扰后细胞β-catenin和OCT4的蛋白表达.结果 β-catenin特异性shRNA的慢病毒感染人胚胎干细胞后,获得稳定表达shβ-catenin的人胚胎干细胞系,Shβ-catenin组β-catenin mRNA表达明显降低,只有WT组mRNA表达的1％,而VECTOR组和WT组之间无明显差异；免疫荧光染色进一步验证shβ-catenin组中基本无β-catenin蛋白的表达,但表达多能性标记OCT4.结论 通过β-catenin特异性shRNA慢病毒载体构建了稳定干扰β-catenin的人胚胎干细胞系.

关键词：人胚胎干细胞、RNA干扰、β-catenin

所属期刊栏目：32

分类号：Q291;Q813.1

资助基金：国家自然科学基金81101510;国家863计划项目2006AA02A102;高等学校博士学科点专项科研基金新教师基金资助项目200805331133;湖南省自然科学基金青年基金09JJ4009;中央高校基本科研业务费青年教师助推基金201012200219

在线出版日期：2012-10-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：1088-1092