半滑舌鳎乙酰辅酶 A 羧化酶α基因全长 cDNA分子克隆及饲料脂肪水平对其在肝脏中表达的影响

摘要：

本试验采用反转录PCR（ RT-PCR）和cDNA末端快速扩增（ RACE）技术从半滑舌鳎肝脏中克隆了乙酰辅酶A羧化酶α（ ACC1）基因全长cDNA，并采用实时荧光定量PCR方法对半滑舌鳎ACC1基因在肠道、肝脏、肌肉、卵巢、脾脏、全脑、肾脏、心脏、肠系膜脂肪等组织中的表达进行了研究；此外，还研究了饲料脂肪水平对半滑舌鳎肝脏中ACC1基因表达的影响。结果表明：1）半滑舌鳎ACC1基因cDNA全长7811 bp，含1个7074 bp的开放阅读框，编码2357个氨基酸，ACC1蛋白计算分子质量为266 ku，等电点为6．42。半滑舌鳎ACC1氨基酸序列保守位点包括1个ATP结合位点（ Gly316～Gly321）、1个生物素结合位点（ Val785-Met786-Lys787-Met788）、1个辅酶A结合位点（ Ser1969～Val1995）。此外，半滑舌鳎ACC1基因存在可变剪接，形成另外2个同工型（ isoforms），与分子质量为266 ku的ACC1相比，分别少8和15个氨基酸。2）半滑舌鳎所有组织中均检测到ACC1基因的表达，肝脏和全脑中ACC1 mRNA相对表达量显著高于其他组织（ P＜0．05），分别为2．67和2．53；肠道、肠系膜脂肪和卵巢中次之，分别为1．14、1．10和0．97；肾脏中最低，仅为0．48。3）与对照组（未添加鱼油组）相比，3．5％鱼油组肝脏中ACC1 mR-NA相对表达量显著降低（ P＜0．05）；7．0％和10．0％鱼油组肝脏中ACC1 mRNA相对表达量进一步降低，显著低于3．5％组和对照组（ P＜0．05），同时10．0％鱼油组低于7．0％鱼油组（ P＞0．05）。综上，本试验克隆出了半滑舌鳎ACC1基因的全长cDNA，并得出半滑舌鳎ACC1蛋白的主要功能位点为ATP结合位点、生物素结合位点、辅酶A结合位点，与其他脊椎动物相比基本保守。半滑舌鳎ACC1基因主要在肝脏和全脑等生脂组织中表达，饲料中添加鱼油显著抑制其肝脏中ACC1基因的表达，且抑制作用与鱼油添加量呈正相关。

关键词：半滑舌鳎、乙酰辅酶A羧化酶α、分子克隆、营养调控、组织表达

分类号：S963(水产养殖技术)

资助基金：国家自然科学基金31272636；江苏省高校自然科学研究重大项目10KJA240002；江苏省自然科学基金BK2012664；江苏省海洋生物技术重点实验室开放基金2009HS15；浙江省重大科技专项2012C12907-2；江苏省优势学科建设工程项目PAPD；国家科技支撑计划2012BAD26B04-04

在线出版日期：2016-04-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共13页

页码：485-497