猪肌肉生长抑制素基因的克隆及原核表达

摘要：

本试验旨在通过基因工程方法获得重组肌肉生长抑制素蛋白.根据基因库肌肉生长抑制素基因序列设计合成特异性引物,引物两端分别加上EcoR Ⅰ和Sal Ⅰ酶切位点及保护碱基,提取汉普夏猪的骨骼肌总RNA,用RT-PCR方法扩增肌肉生长抑制素全长基因,并将其克隆到pMD18-T载体上,测序后EcoR Ⅰ和Sal Ⅰ双酶切,克隆到pET-30a(+)中,构建原核表达载体pET-30a-M,将重组表达质粒转化至E.coli BL21(DE3)中,诱导表达.结果表明,成功扩增出肌肉生长抑制素全长基因;克隆载体经过DNA序列测定,所得基因与国外报道的完全一致;成功构建原核表达载体pET-30a-M;经IPTG诱导,表达出了6×His-M融合蛋白,用组氨酸标签抗体做Western印记证明产物大约48 ku,与预期大小相符,肌肉生长抑制素蛋白在大肠杆菌中成功的进行了表达.

关键词：肌肉生长抑制素、克隆、原核表达、纯化

所属期刊栏目：19

分类号：S8(畜牧、动物医学、狩猎、蚕、蜂)

资助基金：国家重点基础研究发展计划973计划2004CB117506

在线出版日期：2008-03-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：617-621