马疱疹病毒1型gD囊膜蛋白磷酸化位点的鉴定及其对亚细胞定位的影响

摘要：

为了研究蛋白质磷酸化修饰对马疱疹病毒 1 型(EHV-1)gD囊膜蛋白高尔基体驻留的影响,通过蛋白质修饰质谱技术鉴定gD囊膜蛋白磷酸化位点,利用 Overlap PCR 技术构建磷酸化位点突变型真核表达质粒pCAGGS-gD-S391A-myc及pCAGGS-gD-S391D-myc,并转染至 Hela细胞,经 Western blot检测野生型及突变型gD囊膜蛋白表达情况,利用间接免疫荧光技术鉴定 gD 囊膜蛋白及其突变体的亚细胞定位.质谱结果显示,EHV-1 gD囊膜蛋白的S391 位点发生磷酸化修饰;测序结果表明,成功构建模拟磷酸化突变型质粒pCAGGS-gD-S391D-myc及模拟去磷酸化突变型质粒pCAGGS-gD-S391A-myc;间接免疫荧光结果显示,模拟磷酸化突变体gD-S391D-myc与野生型gD-myc定位情况类似,都驻留于高尔基体;而模拟去磷酸化突变体gD-S391A-myc可转运至细胞膜.S391 位点的磷酸化修饰对gD囊膜蛋白驻留于高尔基体起到重要作用,阻断该位点磷酸化修饰可促进gD囊膜蛋白转运至细胞膜,为进一步研究gD高尔基体驻留机制提供参考.

关键词：马疱疹病毒1型、gD囊膜蛋白、磷酸化、亚细胞定位

所属期刊栏目：44

分类号：S852.21;S852.4(动物医学（兽医学）)

资助基金：新疆维吾尔自治区自然科学基金;国家自然科学基金

在线出版日期：2023-05-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：70-76