牛种与非牛种布鲁氏菌ELISA鉴别检测方法的建立

摘要：

为建立鉴别不同种布鲁氏菌的ELISA检测方法,筛选出牛种和非牛种布鲁氏菌差异基因NC-017250,并将其克隆至原核表达载体pET-30a中,并诱导表达.以纯化的NC-017250重组蛋白为包被抗原,通过优化反应条件建立NC-017250重组蛋白的间接ELISA检测方法.结果优化后最适血清稀释度为1 ∶100,兔抗牛HRP-IgG酶标二抗的最佳稀释度1 ∶5000,阴、阳性临界值为0.390.用该方法对布鲁氏菌S2免疫血清、A19免疫血清、PPD、FMD、BVD及IBR等阳性血清样品进行检测,除了布鲁氏菌S2免疫血清检出阳性外其他均为阴性,特异性良好;该方法检测S2和A19免疫血清,并用SPSS软件分析敏感性达95.2％,敏感性较高.重复性试验结果显示,批内变异系数和批间变异系数均＜10％.用该方法检测80份牛源临床布鲁氏菌血清样品,结果阳性率为21.3％(17/80).研究建立的ELISA方法可用于区分牛种和非牛种布鲁氏菌抗体,为布鲁氏菌不同种鉴定试剂盒的研发奠定了基础.

关键词：布鲁氏菌、布鲁氏菌A19疫苗株、NC-017250基因、间接ELISA、鉴别检测

所属期刊栏目：44

分类号：S852.614(动物医学（兽医学）)

资助基金：内蒙古自治区高等学校科学研究项目;内蒙古自治区应用技术研究与开发资金计划

在线出版日期：2023-04-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：26-31