鼠伤寒沙门氏菌sopF基因缺失突变体的构建及调节宿主自噬功能研究

摘要：

为研究鼠伤寒沙门氏菌(S.typhimurium)sopF基因对细菌生理特性的影响及在感染巨噬细胞时的作用.应用CRISPR/Cas9系统对S.typhimuriumsopF基因进行敲除,PCR扩增得到sg20片段和sopF上下游同源臂片段,利用重叠PCR连接3个DNA片段,并与pTargetF质粒连接后,获得敲除质粒pTargetF-sopFF;将pCas与重组质粒PtargetF-sopF电转入S.typhimurium以敲除sopF基因.利用生长曲线测定确定sopF基因对细菌生长的影响,Western blot和免疫荧光试验研究该基因对细菌引起的宿主自噬的影响,CCK8检测该基因对细菌引起的细胞毒性影响.结果显示,S.typhimurium△sopF突变体构建成功,sopF基因的缺失并不影响S.typhimurium的生长,但在感染宿主细胞时,会诱导更强的细胞自噬反应,同时导致更弱的细胞毒性,说明sopF基因对S.typhiimurium的毒力有影响,为后续用CRISPR/Cas9系统构建S.typhimurium突变体及研究sopF基因功能提供参考.

关键词：规律成簇间隔短回文重复/CRISPR关联基因9、鼠伤寒沙门氏菌、sopF基因、自噬

所属期刊栏目：44

分类号：S852.612(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家自然科学基金;国家自然科学基金;中国博士后科学基金特别资助项目;中国博士后科学基金面上资助项目

在线出版日期：2023-04-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：1-7