犬瘟热病毒、犬细小病毒和犬冠状病毒多重PCR方法的建立及应用

摘要：

为建立一种特异、高通量同时检测犬细小病毒(CPV)、犬瘟热病毒(CDV)、Ⅰ型及Ⅱ型犬冠状病毒(CCoV)的多重PCR方法,根据GenBank相关病毒基因序列,选取CPV VP2基因、CDV H基因和CCoV M基因高度保守序列区域,设计引物分别用于扩增长度为573 bp(CPV)、410 bp(CDV)、289 bp(CCoV-Ⅰ)、105 bp(CCoV-Ⅱ)的4条特异性目的片段.经反应条件优化,利用建立的多重PCR进行特异性、敏感性及重复性试验.结果表明,在同一PCR反应体系中可以同时检测到以上4种病毒,而大肠埃希氏菌、沙门氏菌、多形拟杆菌、犬副流感病毒(CPIV)及犬腺病毒(CAV)均未检测到,CPV、CDV、CCoV-Ⅰ及CCoV-Ⅱ的最低检测限分别为1×107 copies/μL、1×103 copies/μL、1×106 copies/μL和1×104 copies/μL,与单项PCR敏感性差异较小;3个不同浓度模板于不同时间、不同PCR仪器扩增,结果重复稳定性良好;使用该方法对50份临床病例进行检测,CPV、CDV、CCoV-Ⅰ及CCoV-Ⅱ的感染阳性率分别为32％(16/50)、24％(12/50)、18％(9/50)、10％(5/50),发现有CPV+CCoV-Ⅰ、CCoV-Ⅰ+CCoV-Ⅱ及CDV+CCoV-Ⅰ+CCoV-Ⅱ混合感染病例.证明建立的多重PCR具有高效、敏感、特异性强、重复性好的特点,并能够实际应用于临床样品检测中,为今后犬重要疫病的流行病学调查及病原学研究提供帮助.

关键词：多重PCR、犬细小病毒、犬瘟热病毒、犬冠状病毒Ⅰ型、犬冠状病毒Ⅱ型

所属期刊栏目：43

分类号：S854.43;S858.292(动物医学（兽医学）)

资助基金：中央级公益性科研院所基本科研业务费专项项目;中国农业科学院科技创新工程项目

在线出版日期：2022-12-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：31-36