伪结核棒状杆菌抗体间接ELISA检测方法的建立及应用

摘要：

为建立伪结核棒状杆菌(Cp)血清抗体间接ELISA检测方法,以热灭活处理的不同的浓度Cp菌株作为固相抗原包被酶标板,用不同封闭液封闭,设置不同的封闭时间,再用不同稀释度的待检血清和不同稀释度的酶标二抗与之反应,以此优化间接ELISA反应条件,确定阳性临界值.对间接ELISA方法的特异性和重复性进行试验,并在此基础上对采集的临床样本进行检测.结果显示,最佳抗原包被量为OD600 nm=0.084的菌悬液100μL,10 g/L BSA封闭时间2 h,一抗血清稀释度为1:400,酶标二抗的稀释度为1:5000,血清阴阳性的OD450 nm值临界值为0.352.该方法仅对Cp阳性血清呈特异性反应,与6种常见病原阳性血清均无交叉反应,特异性较强.批内试验和批间试验的变异系数均小于9.5％,重复性较好.敏感性试验结果表明,当伪结核标准阳性血清进行1:1280稀释时检测仍为阳性,敏感性较强.用该方法对10份经细菌分离鉴定为阳性的血清进行Cp抗体检测,结果均为阳性.用建立的方法对临床随机采集的423份血清进行检测,结果显示阳性率为35％.研究建立的抗体间接ELISA方法为Cp抗体检测及血清学调查奠定了基础.

关键词：伪结核棒状杆菌;间接ELISA;抗体检测

所属期刊栏目：42

分类号：S852.618(动物医学（兽医学）)

资助基金：2018年陕西省农业专项资金支持科技创新驱动项目;国家绒毛用羊产业技术体系项目

在线出版日期：2021-09-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：1-6