鼠抗猪圆环病毒2型"ORF7"多克隆抗体的制备及应用

摘要：

为深入研究新鉴定的"ORF7"蛋白在猪圆环病毒2型(PCV2)感染中的作用,制备了鼠抗ORF7蛋白的多克隆抗体并进行初步应用.首先,克隆ORF7基因,分别构建了重组原核表达质粒pGEX-6p-1-ORF7和重组真核表达质粒pCDH-CMV-Flag-ORF7.将pGEX-6p-1-ORF7进行诱导表达,确定在IPTG 0.8 mmol/L、37℃下诱导12 h表达量最高,且以包涵体形式表达,分子质量大小约为44 ku.将目的蛋白纯化后免疫Balb/c小鼠,第4次免疫后收集小鼠血清,ELISA方法检测其抗体效价为1:10000,可用于免疫印迹试验检测pGEX-6p-1-ORF7表达的重组蛋白.应用获得的多克隆抗体通过IFA检测PCV2感染的PK-15细胞中ORF7蛋白的表达,Western blot检测pCDH-CMV-Flag-ORF7和pEGFP-N1-ORF2蛋白的表达,结果表明制备的多克隆抗体可用于IFA和Western blot检测ORF7蛋白.研究结果为探究ORF7在PCV2感染中的作用提供了基础材料.

关键词：猪圆环病毒2型、ORF7蛋白、多克隆抗体、免疫印迹试验、间接免疫荧光试验

所属期刊栏目：41

分类号：S851.33;S858.28(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家自然科学基金项目31672580

在线出版日期：2020-08-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：15-22