布鲁菌VirB5基因的克隆和原核表达及其蛋白纯化

摘要：

布鲁菌Ⅳ型分泌系统是其重要的毒力因子之一,研究其组分中VirB 5基因的作用对于阐明布鲁菌的致病机制具有重要意义.应用PCR技术从B.suis S2菌株中扩增VirB 5基因,克隆到pMD19T-sim-ple载体,经Eco RⅠ、XhoⅠ酶切,与表达载体pET32a连接,得到重组质粒pET32a-VirB5,测序鉴定正确后,转化至大肠埃希菌BL21(DE3)中,通过IPTG诱导并确定最佳诱导条件,采用Ni柱纯化重组蛋白,并进行SDS-PAGE和Western blot鉴定.结果表明,克隆了717 bp大小的VirB 5基因,构建了重组质粒pET32a-VirB5,诱导条件筛选表明,在37℃、菌液OD600值约为0.6时,用1.0 mmol/L IPTG诱导6 h,蛋白表达量最高,表达的蛋白分子质量约为45 ku,且主要以包涵体的形式存在,研究结果为布鲁菌致病机制的研究提供了材料.

关键词：布鲁菌、VirB5、基因克隆、原核表达

所属期刊栏目：41

分类号：S851.33;S852.61(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家自然科学基金项目;国家重点研发计划项目

在线出版日期：2020-08-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：5-9