猪瘟病毒石门株NS3蛋白的原核表达及其抗体检测间接ELISA的建立

摘要：

为配合猪瘟新型疫苗的研发,建立了猪瘟病毒NS3蛋白抗体检测间接ELISA,以期达到有效区分新型疫苗免疫猪与自然感染猪(包括常规疫苗接种猪)的目的.以接种猪瘟病毒(CSFV)石门株的PK-15细胞为模板提取总RNA,经特异性PCR扩增获得长度为2 049 bp的CSFV NS3基因,将其克隆至插入了具有自聚集自切割功能短肽的原核表达载体pET-32a(+),在大肠埃希菌Rosetta(DE3)中优化表达CSFV石门株NS3基因.Western blot分析表明重组蛋白NS3具有反应原性.将纯化的重组蛋白NS3作为包被抗原建立检测CSFV NS3抗体的间接ELISA,以美国爱德士(Idexx)猪瘟病毒抗体检测试剂盒抗体检测结果为标准,对502份血清样品进行检测.结果表明,所建立方法的特异性为96.9％,敏感性为89.7％,总符合率为95.8％,为猪瘟新型疫苗的推广应用提供了血清学检测方法.

关键词：猪瘟病毒、NS3基因、原核表达、蛋白纯化、间接ELISA

所属期刊栏目：38

分类号：S852.651(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家自然科学基金项目31560704;云南农业大学自然科学基金项目2016ZR12

在线出版日期：2017-05-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：28-34