H9亚型禽流感病毒和禽肺病毒二重RT-PCR检测方法的建立

摘要：

根据GenBank中H9亚型禽流感病毒HA基因和禽肺病毒F基因的保守序列，通过Blast进行比对，在各自保守的基因序列中分别设计了两对特异性扩增引物，引物扩增的片段大小分别为569 bp 和424 bp，应用这两对引物建立了 H9亚型禽流感病毒和禽肺病毒的二重 RT-PCR 检测方法，对建立的方法进行了特异性试验、敏感性试验和临床样品验证。对检测为阳性的样品进行克隆和序列分析，以验证本方法的准确性。特异性试验结果表明，所有参试的 H9亚型禽流感病毒都能扩增出大小为569 bp 的片段，参试的禽肺病毒毒株扩增出424 bp 的片段，没有其他条带出现，而对照的参试毒株在569 bp 和424 bp 处没有任何条带；敏感性试验结果表明，本试验建立的方法能检测到10 pg 的 H9亚型禽流感病毒和禽肺病毒 RNA 模板。应用本试验建立的方法对广西采集的病鸡样品132份进行检测，H9亚型禽流感病毒阳性的样品有6份，禽肺病毒阳性的样品2份；随机各挑取2份 H9亚型禽流感病毒和禽肺病毒阳性 PCR 产物进行克隆和序列分析，经比对分析，2份 H9亚型禽流感病毒阳性 PCR 产物与 H9亚型禽流感病毒（No．JF715045．1）100％同源，2份禽肺病毒阳性 PCR 产物与禽肺病毒株（No．AF187154）100％同源。本试验建立的 H9亚型禽流感病毒和禽肺病毒二重 RT-PCR 检测方法具有特异、敏感、快速的特点，可以用于临床快速准确检测 H9亚型禽流感病毒和禽肺病毒。

关键词：H9亚型禽流感病毒、禽肺病毒、二重反转录-聚合酶链反应、检测

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分类号：S852.659.5(动物医学（兽医学）)

资助基金：广西科技厅专项桂科AD16380009，桂科合14123001-8，桂科重14121003-4-2，桂科专项16-1；广西自然科学基金项目2013GXNSFDA019015；国家万人计划领军人才专项2016-37

在线出版日期：2017-01-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：7-12