猪恒定链的原核表达及其分子结构与功能分析

摘要：

为研究猪恒定链（Ii）分子结构与功能，通过PCR扩增编码完整 Ii及其异构体的基因片段，克隆至 T pMD18-T 载体，在对目的基因进行测序及分析其基因与编码蛋白分子结构，确定功能域及其分子遗传变异的基础上，构建 pET-32a-Ii 重组载体，转化 BL21进行诱导表达，并分析表达产物的免疫活性。结果显示，PCR 扩增了645 bp 和837 bp 的 Ii 及其异构体编码基因，DNA 序列分析其编码氨基酸分别为215个和279个，异构体 Ii 多出了64个氨基酸构成的 Tg 区；分子结构分析显示，猪 Ii 分子由胞内区、跨膜区和胞外区3部分组成，包含有内体定位基元、Ii-key、CLIP、TRIM 等功能域，其中内体定位基元含有特征性 L7 I 和PML17双亮氨酸基序，Ii-key、CLIP、TRIM 氨基酸序列与人和小鼠 Ii 具有高度一致性。遗传变异分析表明，猪 Ii 分子与人、小鼠等哺乳动物的 Ii 同源性为62．7％～95．6％，与鸡、鸭、鸽、鹅等禽类 Ii 的同源性为48．7％～49．5％；空间结构分析显示，猪 Ii 有3个相似的α-helix 构成，其间间隔由相似氨基酸构成的2个转角，转角关键位点氨基酸具有高度一致性；Ii 编码基因在 BL21细胞获得了有效表达，目的蛋白大小约41 ku， Western blot 和免疫荧光检测显示，表达产物具有良好的反应原性。试验成功获得了猪 Ii 及其异构体编码基因，明确了其功能区、分子遗传变异等特征，诱导表达获得了具有良好免疫活性的 Ii 重组蛋白，为进一步研究猪 Ii 分子结构与功能奠定了基础。

关键词：猪、恒定链、原核表达、分子结构、功能分析

所属期刊栏目：37

分类号：S852.42;Q513.2(动物医学（兽医学）)

资助基金：山东省自然科学基金项目ZR2013CQ006

在线出版日期：2016-11-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：64-69