牛源肠出血性大肠埃希菌的分离鉴定及进化分析

摘要：

在牛群中分离肠出血性大肠埃希菌（EHEC），并将分离菌株与国际上流行的 EHEC株之间的亲缘关系进行比较。应用 PCR 方法结合头孢克肟-亚碲酸钾山梨醇麦康凯琼脂（CT-SMAC）平板分离法对采集的565份样本（牛粪便397份，牛奶99份，奶牛场环境中的水样69份）进行 EHEC 分离和鉴定，在此基础上，对分离的菌株进行 EHEC 相关毒力基因的检测及致 Vero 细胞毒性研究。根据大肠埃希菌 MLST 数据库（http：／／mlst．ucc．ie／mlst／mlst／dbs／E．coli）提供的多位点序列分型（MLST）方案，利用 MEGA 5．0软件分别对分离菌株进行分子分型及遗传进化分析。结果从565份样本中共分离到 EHEC 40株，占分离样本总数的7．1％（40／565）。40株 EHEC 涵盖了17种血清型，以 O157（4／40）、O26（4／40）、O91（7／40）、O100（4／40）、O97（6／40）、O92（2／40）为优势血清型。对40株 EHEC 进行相关毒力基因的检测发现，stx1、stx2、ehxA、saa 基因检出率分别为82．5％（33／40）、75％（30／40）、90％（36／40）和27．5％（11／40），远高于 eae （5％，2／40）、wzxO157（10％，4／40）基因检出率。38株携带 stx1／stx2基因的 EHEC 均能产生志贺毒素，且能致 Vero 细胞产生病变。MLST 分析表明，40株 EHEC 共有7个序列型（ST），其中 ST297为优势序列型，占57．5％（23／40）。遗传进化分析表明，ST297型与国际上流行的 EHEC 具有较近的亲缘关系。本次分离的40株 EHEC 之间具有一定的分子多态性，与国际上流行的 EHEC 具有较近的亲缘关系。除了 O157 EHEC 外，非 O157 EHEC 对人类公共卫生安全也可构成一定威胁，因此，我国应加强对这一类菌株的监测与检测。

关键词：肠出血性大肠埃希菌、分离与鉴定、多位点序列分型、序列型、进化分析

分类号：S855.1(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家自然科学基金重点项目31030065

在线出版日期：2015-09-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：11-16,17