禽流感病毒 H3N2亚型三重 RT-PCR 检测方法的建立

摘要：

为建立检测禽流感病毒（AIV ）且同时区分 H3N2亚型AIV 的方法，本研究根据 H3、N2亚型AIV HA、NA基因及AIV最保守M 基因的保守区域，设计并筛选出3对特异性引物，通过优化反应条件，建立了AIV H3N2亚型和M 基因三重RT‐PCR的检测方法。对该法进行特异性及敏感性检测，并通过该三重RT‐PCR方法对96份临床样品进行检测。结果显示，H3N2亚型AIV可扩增出3条特异性条带，其中518 bp为AIV M 基因、418 bp为N2亚型AIV NA基因、271 bp为H3亚型AIV HA基因；H3亚型和N2亚型AIV均可扩增出2条特异性条带，大小分别为518 bp、271 bp和518 bp、418 bp；其他亚型AIV可扩增出一条特异性条带，大小为518 bp；常见禽病病原体均未扩增出任何条带。敏感性试验表明该法对 H3N2亚型AIV的检测下限为100 pg ；96份临床样品检测结果与病毒分离鉴定结果一致。本研究所建立的AIV H3N2亚型和M 基因三重RT‐PCR为一种简便、快速、有效的检测方法。

关键词：禽流感病毒、H3N2亚型、M 基因、三重RT-PCR

分类号：S852.659.5;Q789(动物医学（兽医学）)

资助基金：广西特聘专家专项项目2011B020；广西科技攻关重大专项项目1222003-2-4；广西畜禽疫苗新技术重点实验室项目13-051-27-A-2

在线出版日期：2015-02-04（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：7-10,11