10.3969/j.issn.1007-5038.2015.01.007
微小隐孢子虫类钙调蛋白基因的克隆与原核表达
为了对微小隐孢子虫(C . p arv um)类钙调蛋白(CM L )基因进行原核表达,分析重组表达蛋白的反应原性。以 C .parvum卵囊cDNA为模板,用PCR方法扩增得到C .parvum CML基因。将CML基因连接到克隆载体pMD18‐T ,获得重组质粒pMD‐CML ,经限制性内切酶 BamH Ⅰ和 Xho Ⅰ双酶切后,连接到经相同内切酶酶切的表达载体pGEX‐6p‐1上,构建重组表达质粒,转化到大肠埃希菌BL21(DE3)中进行诱导表达。利用GST 亲和树脂法纯化重组表达蛋白,对纯化的重组蛋白进行Western blot分析。结果表明,成功构建了重组原核表达质粒pGEX‐CML ,重组质粒转化菌经IPTG诱导后成功地表达出了分子质量约为51 ku的重组蛋白rCM L ,纯化的蛋白rCM L能与感染兔隐孢子虫(C .cuniculus)的兔血清发生特异性反应,具有很好的反应原性。
微小隐孢子虫、类钙调蛋白基因、克隆、原核表达
S852.723;Q785(动物医学(兽医学))
国家科技重大专项项目2012ZX10004220;中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资金项目2013JB13;家畜疫病病原生物学国家重点实验室开放基金课题SKLVEB2013KFKT017;上海市科技兴农重点攻关项目沪农科攻字2005第3-4号
2015-02-04(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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