微小隐孢子虫类钙调蛋白基因的克隆与原核表达

摘要：

为了对微小隐孢子虫（C ． p arv um）类钙调蛋白（CM L ）基因进行原核表达，分析重组表达蛋白的反应原性。以 C ．parvum卵囊cDNA为模板，用PCR方法扩增得到C ．parvum CML基因。将CML基因连接到克隆载体pMD18‐T ，获得重组质粒pMD‐CML ，经限制性内切酶 BamH Ⅰ和 Xho Ⅰ双酶切后，连接到经相同内切酶酶切的表达载体pGEX‐6p‐1上，构建重组表达质粒，转化到大肠埃希菌BL21（DE3）中进行诱导表达。利用GST 亲和树脂法纯化重组表达蛋白，对纯化的重组蛋白进行Western blot分析。结果表明，成功构建了重组原核表达质粒pGEX‐CML ，重组质粒转化菌经IPTG诱导后成功地表达出了分子质量约为51 ku的重组蛋白rCM L ，纯化的蛋白rCM L能与感染兔隐孢子虫（C ．cuniculus）的兔血清发生特异性反应，具有很好的反应原性。

关键词：微小隐孢子虫、类钙调蛋白基因、克隆、原核表达

分类号：S852.723;Q785(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家科技重大专项项目2012ZX10004220；中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资金项目2013JB13；家畜疫病病原生物学国家重点实验室开放基金课题SKLVEB2013KFKT017；上海市科技兴农重点攻关项目沪农科攻字2005第3-4号

在线出版日期：2015-02-04（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：26-30