金黄色葡萄球菌SirH主要抗原表位区的表达及其抗血清制备

摘要：

为在大肠埃希菌中表达金黄色葡萄球菌Sir H主要抗原表位区并制备相应纯化重组蛋白的抗血清，通过生物信息学软件分析Sir H的主要抗原表位区，PCR扩增Sir H主要抗原表位区的编码序列，插入表达载体pGEX-4T-1中，构建重组表达载体pGEX4T1-sirH。该载体经酶切和DNA测序鉴定正确后，转化大肠埃希菌BL21，IPTG诱导表达，GST 亲和层析纯化获得重组蛋白后，采用Western blot方法检测目的蛋白的反应原性。用纯化的重组蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体，间接ELISA检测抗血清效价。结果显示，PCR扩增的SirH主要抗原表位区的编码序列长度约759 bp ，SDS-PAGE初步测定表达蛋白的分子质量约为54 ku ，与理论值相符。亲和层析纯化获得了目的蛋白，Western blot结果证实该纯化蛋白能与乳房炎患病奶牛恢复期的血清发生反应。应用纯化蛋白免疫新西兰大白兔后制备的抗血清效价在1∶409600以上。结果表明，Sir H主要抗原表位区能刺激机体产生较强的体液免疫应答，Sir H是一个有潜力的疫苗候选抗原。

关键词：金黄色葡萄球菌、SirH、抗原表位、蛋白表达、抗血清制备

分类号：S852.611;Q789(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家自然科学基金项目31360084；贵州省科技厅社发项目黔科合[2010]3144；贵州省卫生厅科学技术基金项目gzwkj2011-1-018；贵阳医学院博士启动基金项目K2010-32；贵州省科技厅科学技术基金项目黔科J字[2010]2273

在线出版日期：2014-09-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：24-27