牛副流感病毒3型NP基因原核表达及纯化

摘要：

旨在对牛副流感病毒3型(BPIV3) NP基因进行分段克隆及原核表达,获得纯化蛋白.根据GenBank中公布的牛副流感病毒3型NP蛋白基因序列(JQ063064)设计合成2对特异性引物,采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)的方法,以牛胚肾细胞(MDBK)培养的BPIV3 NM09株病毒液提取的RNA为模板,扩增获得2段NP基因序列(NP1、NP2),将2个片段克隆到PGEX-6P-1表达载体,构建具GST标签的重组质粒PGEX-NP1、PGEX-NP2,将2种阳性重组质粒分别转化至大肠埃希菌BL21(DE3),优化诱导表达条件进行可溶性分析,并用SDS-PAGE及Western blot进行鉴定,同时利用亲和层析法将重组蛋白纯化.最终获得大小分别为42.3 ku、38.5 ku的重组蛋白,其中PGEX-NP1为包涵体表达,PGEX-NP2为可溶性和包涵体2种表达形式,因PGEX-NP2蛋白疏水性强、等电点较高,其蛋白大小比理论值偏大;Western blot结果显示2种重组蛋白都具有良好的反应原性.

关键词：牛副流感病毒3型、NP基因、原核表达、蛋白纯化

所属期刊栏目：35

分类号：S852.659.5;Q786(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家863计划项目2011AA10A213;吉林省特种经济动物疫病防控研究创新团队项目20121823

在线出版日期：2014-04-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：20-28