H1亚型禽流感病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立

摘要：

本研究旨在建立一种检测H1亚型禽流感病毒(AIV)的SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR方法.根据对GenBank中H1亚型AIV HA基因序列的分析,设计针对H1亚型AIV的HA基因特异性引物,并以H1亚型AIV的cDNA为模版,构建重组阳性质粒.采用梯度稀释重组标准品阳性质粒DNA的方法,建立SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR(real-time PCR)标准曲线.敏感性试验结果显示,扩增效率和标准误差分别为100.9％和0.011 7,熔解曲线呈单一熔解峰.在35个Ct值内该方法可检测到100个拷贝的标准品DNA；特异性试验结果显示,该方法对于其他亚型AIV和禽呼吸道病原体不能检出；重复性试验结果显示,组内变异系数小于1％.建立的Real-time PCR具有特异、敏感、快速、重复性好等优点,可用于临床上H1亚型AIV的检测.

关键词：H1亚型AIV、SYBR Green Ⅰ、实时荧光定量PCR

所属期刊栏目：34

分类号：Q789;S852.659.5(基因工程（遗传工程）)

资助基金：广西科技项目桂科攻10100014-5,桂科专项11-3;广西特聘专家专项2011B020;广西科技攻关重大专项桂科重1222003-2-4;广西自然科学基金项目2011GXNSFA018088

在线出版日期：2013-08-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：29-34