水牛IFN-γ在毕赤酵母中的表达及其单克隆抗体的制备

摘要：

本研究旨在建立水牛IFN-γ(Bubalus bubalus IFN-γ,Bb IFN-γ)体外释放检测法,为定量检测水牛IFN-γ、开发水牛结核病及其他疫病的检测技术奠定基础.克隆了水牛IFN-γ成熟肽基因片段,根据测序结果,在不改变氨基酸序列的情况下,将密码子替换成毕赤酵母偏爱密码子并合成全基因,进一步用毕赤酵母GS115表达了水牛IFN-γ成熟肽基因.通过水疱性口炎病毒(VSV)在牛肾细胞(MDBK)上检测了其抗病毒活性,抗VSV活性为7.44×105 U/mL.利用酵母表达的水牛IFN-γ蛋白免疫Balb/c小鼠,并筛选阳性杂交瘤细胞,获得5株高效价的单克隆抗体.利用该重组蛋白免疫日本长耳大白兔,得到高效价的抗水牛IFN-γ多克隆抗体.用所获得的单克隆抗体及多克隆抗体建立了检测水牛IFN-γ的双抗体夹心ELISA方法,检测灵敏度达到125 pg/mL.通过建立的方法分别检测了原核表达的奶牛IFN-γ、梅花鹿IFN-γ、弥猴IFN-γ以及其他7种非相关重组蛋白,结果表明所建立的方法灵敏度高,特异性好.

关键词：水牛、γ干扰素、毕赤酵母、双抗体夹心酶联免疫吸附试验、单克隆抗体

所属期刊栏目：34

分类号：S852.4(动物医学（兽医学）)

资助基金：公益性行业科研专项"布鲁氏菌病、牛结核病防控技术研究"200903027;家畜生产运输过程中环境应激响应及调控技术研究201003060

在线出版日期：2013-08-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：71-77