微小隐孢子虫CP15-P23-CP15/60基因的融合表达及抗血清的制备

摘要：

以微小隐孢子虫基因组DNA为模板,PCR扩增获得子孢子表面抗原CP15、P23和CP15/60基因.利用重叠延伸PCR(SOE PCR)将该3段基因片段串联在一起,各基因片段之间引入柔性氨基酸接头(GGGGS)编码基因.将串联基因克隆到原核表达载体pET-28a(+)上,构建重组表达载体,转化到大肠埃希菌BL21(DE3)中进行诱导表达,将纯化的重组蛋白免疫Balb/c小鼠制备多克隆抗体.结果表明,获得了CP15-P23-CP15/60融合基因,并在大肠埃希菌中高效表达,Western blot显示重组蛋白能被牛抗微小隐孢子虫阳性血清识别,制备的多克隆抗体能被重组蛋白特异性识别,表明获得的重组蛋白具有较好的抗原性.

关键词：微小隐孢子虫、CP15-P23-CP15/60融合基因、原核表达、重叠延伸PCR

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分类号：S852.42;Q786(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家科技重大专项项目2012ZX10004220-008;中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资金项目2012JB16;国家"十一五"科技支撑计划项目2007BAD40B05;上海市科技兴农重点攻关项目沪农科攻字2005第3-4号

在线出版日期：2012-10-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：54-59