抗隐孢子虫鼠基因型CP15/60蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

摘要：

为获得高特异性的抗隐孢子虫单克隆抗体(monoclonal antibody,McAb),以原核表达的隐孢子虫鼠基因型(Cryptosporidium mouse genotype)子孢子表面抗原CP15/60为免疫原,免疫Balb/c小鼠.取免疫鼠脾细胞与SP2/0细胞进行融合,用间接ELISA方法进行抗体效价测定,有限稀释法进行亚克隆.以常规染色体分析法进行杂交瘤细胞的染色体分析,用McAb亚类鉴定试剂盒鉴定McAb亚型、间接ELISA法测定相对亲和力及交叉反应性、Western blot检测抗体的特异性.结果获得了2株能稳定分泌抗重组CP15/60(recombinant CP15/60,rCP15/60)的单克隆抗体杂交瘤细胞株,分别命名为B4F7和D8H5,其腹水抗体效价均达到1∶107;染色体数目B4F7株为97条±4条、D8H5株为90条±7条,且观察到标志染色体;McAb亚型均为IgG1,轻链均为κ链;相对亲和力常数B4F7株为0.009 μg/mL、D8H5株为0.016 μg/mL;2种McAb均与rCP15/60蛋白发生特异性反应,与柔嫩艾美耳球虫卵囊可溶性蛋白、弓形虫裂殖子蛋白以及日本血吸虫虫体蛋白均无交叉反应,证实本试验获得了2株高特异性的抗隐孢子虫McAb.

关键词：隐孢子虫、CP15/60蛋白、单克隆抗体

所属期刊栏目：31

分类号：S852.723(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家科技支撑计划项目2007BAD40B05;国家863项目2006AA10A207;上海市科技兴农重点攻关项目沪农科攻字2005第3-4号

在线出版日期：2011-01-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：63-67