实时荧光定量PCR构建朊病相关细胞因子标准品质粒和标准曲线

摘要：

为能够用实时荧光定量PCR检测PrP106-126作用的鼠巨噬细胞细胞因子的表达水平,构建目的基因IL-1β、TNF-α、IL-6和内参基因β-actin的标准品质粒和标准曲线.根据GenBank中鼠基因编码区保守序列,设计特异性引物;细胞经PrP106-126作用后,提取总RNA.经反转录、PCR扩增、纯化、连接和转化后,提取质粒并测序鉴定,获得IL-1β、TNF-α、IL-6和β-actin质粒;将质粒梯度稀释,进行荧光定量PCR,获得标准曲线及回归方程.结果显示,产物溶解曲线峰值单一,引物特异性高;标准曲线相关系数r2=0.999,表明线性关系好,成功构建了目的基因和内参基因的标准品质粒和标准曲线.

关键词：PrP106-126、Real-time PCR、质粒、标准曲线

所属期刊栏目：31

分类号：S852.659.27(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家科技支撑计划项目2008BAI54B06

在线出版日期：2010-08-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：11-14