梅花鹿γ干扰素克隆表达及抗病毒活性测定

摘要：

提取经植物血凝素诱导培养的梅花鹿外周血淋巴细胞总RNA,应用RT-PCR方法扩增出梅花鹿γ干扰素成熟蛋白基因并将其克隆到pMD18-T载体上,测序结果表明,扩增片段为梅花鹿γ干扰素成熟蛋白序列,与GenBank上发表的干扰素序列同源性为100%.将其重组到原核表达载体pET32a(+)上,并在大肠埃希菌BL21中实现了高效表达.表达产物以His-Tag融合蛋白的形式存在,表达量约占细菌总蛋白的32.6%.用镍亲和层析法对蛋白进行纯化,并利用VSV-MDBK/IBRV细胞系统分析其生物活性,重组梅花鹿γ干扰素抗病毒活性分别约为7.25×104 U/mL和4.61×104 U/mL.结果表明,重组梅花鹿γ干扰素特异性好,而且抗病毒活性比较稳定.

关键词：梅花鹿、γ干扰素、抗病毒活性

所属期刊栏目：30

分类号：S858.9;S852.4(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家973项目2006CB504401;湖北省自然基金重大项目2008CDA073;艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治科技重大专项2009ZX10602-14, 2008ZX10301

在线出版日期：2010-01-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：1-5