大肠杆菌F18ac菌毛FedA蛋白的表达与鉴定

摘要：

根据已经发表的F18ac菌毛A亚单位的基因序列(FedA)设计一对引物,利用PCR技术从重组质粒T 8813A中扩增到一段序列,并按预定的阅读框插入表达性质粒载体pGEX-6p-1中的谷胱苷肽转移酶(GST)基因的下游,获得重组质粒pPFedA/ac,并转化大肠杆菌BL 21获得重组菌PPFedA/ac.琼脂糖凝胶电泳、序列测定及分析表明,该序列大小为456 bp,与已发表的FedA/ac结构编码序列完全一致.通过对菌体裂解物的SDS-PAGE分析以及Western-blotting鉴定,证明重组大肠杆菌PP FedA/ac的可以表达融合蛋白形式的FedA/ac(命名为GST- FedA/ac),即FedA/ac蛋白(15.317 ku)与谷胱苷肽转移酶(27.335 ku)相连组成分子量为42.652 ku的融合蛋白.利用GST-FedA/ac制备的兔抗GST-FedA/ac血清与大肠杆菌F107/86株(F18ab+)、2 134 P株(F18ac+)进行的玻板凝集试验呈现阳性反应,进一步表明了表达的正确性.

关键词：大肠杆菌、菌毛、F18、FedA/ac、表达、鉴定

所属期刊栏目：26

分类号：S852.612(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家高技术研究发展计划863计划2003AA222141

在线出版日期：2005-07-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：51-55