检测小鼠肝炎病毒的SNaPshot分型技术及其应用
建立一种能对MHV1、MHV3、JHM、A59 4种常见小鼠肝炎病毒(Murine Hepatitis Virus,MHV)进行分型检测的SNaPshot新方法.根据MHV 4种常见毒株基因序列比对结果,设计内外两对PCR通用引物和4个单碱基延伸引物,提取MHV 4种常见毒株RNA,逆转录后进行PCR扩增,纯化扩增产物,用SNaPshot方法进行单碱基延伸,将产物进行毛细管凝胶电泳,根据电泳结果分析毒株基因型.优化SNaPshot分析条件,进行灵敏度、特异性分析.用ELISA法和SNaPshot方法检测41例小鼠(Musmusculus)血清样本,将阳性样本进行克隆测序检测.当T1 ～ T4引物修饰的polyT的数量分别为0、3、10和15,其浓度比为4∶6∶5∶10,引物大小分别为16 bp、19 bp、26 bp和31 bp时,SNaPhot分型检测MHV cDNA的最低浓度为1.25 mg/L,特异性为100％,与ELISA和T-克隆测序比较,其准确性为100％ (41/41),阳性样本均为JHM毒株.实验结果说明,所建立的SNaPshot检测方法能对MHV1、MHV3、JHM、A59进行分型检测,并且具有灵敏、特异、准确的优点.
小鼠肝炎病毒、SNaPshot检测、酶联免疫吸附试验
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Q81(生物工程学(生物技术))
重庆市科委应用开发项目No.CSTC2014YYKFA110033;
2017-01-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
1084-1091
