基因组步移法克隆小菜蛾CYP9G2基因的上游序列

摘要：

利用4种产生平端切头的限制性内切酶消化小菜蛾(Plutella xylostella)的基因组DNA,然后利用DNA连接酶的催化作用,在4种不同平端切头的小菜蛾基因组DNA上连接一个氨基化的基因组步移衔接头序列,针对衔接头及已克隆的CYP9G2基因的序列,设计两对PCR上、下游引物,进行PCR扩增、T-A克隆和阳性克隆的巢式PCR验证,通过测序克隆到了小菜蛾CYP9G2基因上游未知序列约1.8 kb.通过对该基因的上游序列进行信息分析,发现1个可能的节肢动物动物转录起始子(Inr),3个CAAT样盒及1个抗氧化剂样反应因子,共5个可能的顺式调控元件.研究还表明,利用基因组步移方法可以快速地克隆已知序列的上游未知序列,实验操作经济、简便,对于已知cDNA序列或部分基因组序列的基因,其上游调控序列的克隆,基因组步移具有较高的实用价值.

关键词：小菜蛾、CYP9G2、顺式调控元件、基因组步移、聚合酶链反应

所属期刊栏目：44

分类号：Q963(昆虫学)

资助基金：中国科学院知识创新工程领域前沿项目KSCX3-IOZ-05;国科金外资助字第30311120206号项目和国家高技术研究发展计划863项目2002AA601160;留学回国人员科研启动基金2006GD056

在线出版日期：2009-11-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：112-116