三叶因子Bm-TFF2突变体在原核体系中的表达及促细胞迁移活性

摘要：

大蹼铃蟾三叶因子Bm-TFF2具有较人TFF2更强的促细胞迁移和抗凋亡活性.该研究利用RT-PCR方法扩增得到野生型Bm-TFF2的基因,然后分别构建N端、C端和分子中两个精氨酸突变的突变体,最后连接表达载体产生pET32a(+)/Bm-TFF2突变型重组质粒,转入大肠杆菌中,经37℃培养,IPTG诱导,其融合蛋白主要存在于包涵体中,用组氨酸标签的亲合柱纯化溶解后的包涵体上清,进一步用RP-HPLC纯化得到硫氧还蛋白(TRX)/Bm-TFF2突变型融合蛋白.通过SDS-PAGE和Western blotting检测分析其纯度和特异性.最终,从1L培养基中得到20mg纯度为95％的三种重组突变型融合蛋白.三种突变型重组蛋白都具有剂量依赖性的促细胞迁移活性,并且其活性无显著差异.该研究为进一步研究Bm-TFF2结构和功能的关系以及揭示其作用的分子机制奠定了基础.

关键词：Bm-TFF2、突变体、表达、纯化、细胞迁移

所属期刊栏目：32

分类号：Q786;Q959.53(基因工程（遗传工程）)

资助基金：中国科学院"西部之光"Y102291081;"973"项目2010CB529800;国家基金委面上项目30870304

在线出版日期：2011-11-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：379-385