肝癌组织及细胞系总RNA抽提逆转及基因克隆方法的改进与比较

摘要：

该文建立了高效肝组织及细胞总RNA抽提、反转录以进行基因克隆和实时定量PCR(q-RT-PCR)的方法.比较了2种反转录酶(M-MLV和SuperScriptII)、2种cDNA合成引物(Oligo dT和random 6 primer)对总RNA反转录效率的影响,与4种DNA聚合酶(Taq聚合酶、Pfu聚合酶、LA taq聚合酶、Prime Star聚合酶)进行长片段基因克隆的能力及效率;同时,该研究比较了不同质量总RNA对有效进行q-RT-PCR与长片段分子克隆的影响.新建立的RNA提取方法使得RNA完整性和均一性提高.RNA的完整性及均一性对长片段cDNA的克隆至关重要.部分降解的组织RNA及细胞RNA仅适合于q-RT-PCR检测mRNA的表达水平,而不适合于cDNA的克隆.

关键词：肝癌组织及细胞系、总RNA抽提、反转录、q-RT-PCR、长片段基因克隆

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分类号：Q344:Q78;R735.7;Q813.1(遗传学分支学科)

资助基金：国家自然科学基金30800407

在线出版日期：2009-12-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：520-526