稳定表达草鱼LamR鱼类细胞的建立及对基因Ⅱ型GCRV增殖的影响

摘要：

通过构建草鱼LamR(Ctenopharyngodon idella LamR,CiLamR)真核表达质粒,转染GCRV非敏感细胞系鲤鱼上皮细胞(EPC)和敏感细胞系草鱼肾细胞(CIK),利用G418筛选获得稳定表达CiLamR的细胞,经Western Blot验证CiLamR稳定表达细胞系的构建.采用Ⅱ型GCRV分别接毒CiLamR稳定表达EPC和CIK,检测接毒后Ⅱ型GCRV拷贝数差异,研究草鱼37 kDa/67 kDa层粘连蛋白受体(37 kDa/67 kDa laminin receptor,LamR)对Ⅱ型GCRV增殖的影响.结果显示:经PCR扩增获得927 bp CiLamR完整开放阅读框(ORF),并成功克隆进入真核表达质粒pEYFP-Mem,获得pEYFP-Mem-CiLamR重组质粒,转染并经过G418筛选后获得约80％阳性荧光的细胞.Western Blot证实稳定表达CiLamR的EPC和CIK细胞系构建成功.以不同初始浓度接种EPC-pEY-FP-Mem、EPC-pEYFP-Mem-CiLamR细胞均未检测到Ⅱ型GCRV增殖,CIK-pEYFP-Mem、CIK-pEYFP-Mem-CiLamR可检测到病毒增殖,但是增殖量无明显差异.结果表明:CiLamR蛋白对基因Ⅱ型GCRV增殖无明显影响.

关键词：草鱼(Ctenopharyngodon idella)、层粘连蛋白受体、稳定表达细胞系、基因Ⅱ型、GCRV

所属期刊栏目：51

分类号：S941.4(水产保护学)

资助基金：国家重点研发计划;国家大宗淡水鱼类产业技术体系项目;广东省现代农业产业技术体系创新团队建设专项;广东省现代农业产业技术体系创新团队建设专项

在线出版日期：2021-07-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：21-26